时隔3年后，韩呐喊发布最新科研成果论文

暌违3年，曾处于大媒体螺旋状的韩风雪公开了一项不断更新研究课题课题。近日，韩风雪在先为印本其网站BioRxiv上撰写了一篇关于基因编辑的新文章：Background free tracking of single RNA in living cells using catalytically inactive CasE。文章共计5名所作，依次为Feng Gao， Yue Sun， Feng Jiang， Xiaoyue Bai， Chunyu Han，工作单位以外为河南科技国立大学基因编辑研究课题里面心。其里面，韩风雪为通讯所作。据明白，期刊里面说明的CasE是Ⅰ-E型 CRISPR复合物的核心成分，它通过结合特定的茎环中周边单独处理pre-crRNA，称为 CasE Binding S，简称为CBS。CasE自由派His20参与依赖性，ΔHis26-TtCse3变异的CasE（dCasE）则失掉了依赖性，但即便如此与其化学合成相结合。在该研究课题里面，通过将 split 紫外光与dCasE的N端和C-侧边（ΔHis20）融为一体，重构了水蛭RNA监控工具VN-dCasE-VC。该种系统仅在假定靶RNA时才放出紫外光，从而增最弱准确性。在活巨噬细胞里面进行上图形学的RNA监控，不需要特定的亚巨噬细胞原产。CasE-GFP和dCasE-GFP在HEK293T巨噬细胞里面的高新科技水平暗示和以外匀原产确实CasE和dCasE简便活巨噬细胞里面的RNA操作。为了飞行测试CasE在灵长目巨噬细胞里面暗示时是否是具有最弱活性，所作重构了“关闭”报告基因真核巨噬细胞CBS-GFP-N1。它由5′-UTR里面的GFP mRNA和CasE结合核苷酸（CBS）组成。当CasE被引入种系统时，GFP暗示新科技水平急剧下降。同时，为了进一步飞行测试CasE活性，所作还重构了“打开”报告基因真核巨噬细胞RED-16×CBS-Lin28-C1，其里面CBS插入RED过氧化物基因的3′-UTR区外和Lin28的上游。Lin28是RNA核沿用路径，在其3′-UTR里面具有lin28路径的RED过氧化物mRNA基本上不能译成酵素。CBS-CasE依赖这两项切断lin28路径并从核释放靶mRNA用作译成（上图1E和上图1F）。这些确实CasE可以结合并切割灵长目巨噬细胞里面的CBS。另外，为了将dCasE-CBS相互作用设计者到RNA监控种系统里面，所作通过将split-FP5-7与dCasE蛋白结合。发现一个版，即VN-dCasE-VC很难放出紫外光，这意味著是由于不正确的折叠或不稳定的状况，但是当与靶RNA（CBS）结合时，可以在紫外光成像下确实地俘获紫外光路径，即使VN-dCasE-VC暗示真核巨噬细胞的转染剂量非常很低。接下来，所作使用VN-dCasE-VC种系统监控灵长目巨噬细胞里面过暗示的β-肌动蛋白（β-Actin）的mRNA，VN-dCasE-VC种系统在巨噬细胞质里面看出出最弱紫外光。此外还仔细观察到，向靶mRNA添加更多CBS可改善路径，紫外光监控更清晰，因此，可以通过增加CBS的量来检测很低丰度的mRNA。总的来说，韩风雪制作团队发明了一种重新RNA监控工具，将其定名为为VN-dCasE-VC，该种系统能够监控活巨噬细胞里面不能背景的特定RNA，通过紫外光将其上图形学。现有已有两种活巨噬细胞RNA监控激光工具，一种是MS2，一种是Cas13a，韩风雪制作团队开发的dCasE种系统，激光效果由于MS2，而且，dCasE蛋白的相对分子质量为22kDa，远极小Cas13a的130kDa，dCasE的小相对分子质量更容易递送至巨噬细胞内，因此更适合用作活巨噬细胞的RNA监控。一位近似于韩风雪的社会大众谈及：“这一本书是在此之前韩风雪工作的延续，目的都是开发基因编辑工具。”不过，比如说的是，该研究课题现有撰写于先为印本其网站，未经过几位评议，对此，有科研机构社会大众指出，替补在未经几位评议的先为印本上，是为了获得替补权。“韩风雪下一步还会弃正式期刊的。”前述社会大众推测。不告诉此次重新研究课题课题是否是会再度给韩风雪产生关注，2016年5同月，《自然—微生物新科技》撰写韩风雪制作团队重新基因编辑新科技NgAgo，被媒体以“托坐冷板凳、十年憋大招”的故事原型炒作而走红，以后半年，韩风雪个人及其所在国立大学陆续获得各类荣衔和大量补助资助，但亦有全国性多名基因编辑应用科学家备案发坚称试验中结果难以重复，坚称试验中结果的真实性。2017年8同月，《自然—微生物新科技》撰写题为《是该资料讲的时候了》社论，宣布撤军韩风雪制作团队于2016年5同月2日撰写在该期刊的期刊。2018年9同月，河南科技国立大学即日起，韩风雪制作团队不假定主观造假。但依据有关规定，取消韩风雪所获得的劳动模范，终止韩风雪制作团队承担的科研机构项目并收回科研机构补助。韩风雪制作团队回应称，试验中设计者假定缺陷、研究课题处理过程假定着不严谨的问题。有业界社会大众对此：“这波之后，NgAgo这个研究课题方向在里面国认真得很慢。韩风雪他们的工作开展一起也比较困难，连很多学生也不能新招。”